Bigox.kz

‘Биология, Экология, Медицина’ бөлімінің мұрағаты

     МКА биологияда, мал дәргерлік  және медицна ғылымдарында өте сезімтал анализ (талдау) жасауға баға жеткізсіз көмек көрсетеді. Қазіргі таңда Моноклоналды антиденелерді қолдана отырыа, көптеген адам мен малдардың аса қауіпті жұқпалы ауыруларын анықтауға арналған тиімді, сезімталдығы жоғары дагностикалық тәсілдер ұсынылып отыр. Айталық, бруцеллез, туберкулез, құс тұмауы, африкалық шошқа обасы және тағы басқа. Зерттеушілер бруцеллездің қоздырғышының Поли-Б антигені мен сыртқы мимбрана белектарының иммуногендік қасиеті осы микофтың тұтас жасушаларына қарағанда біршама жоғары болатындығын дәлелдеп берді. Толығырақ »

 Моноклоналды антиденелердің байланысу константасын J. Betty et all. әдісімен анықтадық. Бұл үшін иммунологиялық реакцияларға арналған полистеролды планшеттің үш қатары GP-51 P-24 лейкоз антигені, яғни 0,01 мг/мл және тағы үш қатары оңтайлы концентрациядан екі есе аз, яғни 0,005 мг/мл мөлшерінде антигенмен сесибилизацияланды. Түні бойы +4⁰С –та қалдырылған планшетті твин-20 қосылған фосфатты тұз ерітіндісімен  үш рет шайды.

Толығырақ »

Моноклоналды антиденелерді тазарту және олардың телімділігін анықтау

    Моноклоналды антиденелерді құрылымы белгілі химиядық реагент ретінде қарастыруға болады.Моноклоналды антиденелерді шексіз мөлшерде алу үшін гибридомаларды сингенді тышқандардың құрсақ қуысында өсіреді.

Асцит сұйықтығын иммуноглобулин фракцияларын аммоний сульфатының иммуноглобулин фракцияларын аммоний сульфатының қаныққан ертіндісімен тұндырып, диализдеу арқылы алады. Толығырақ »

Брэдфорд бойынша белокты анықтау

 Ерітіндіні келесі реттілік бойынша дайындадық: 100 мг кумассиді 50 мл этанолда ерітіп, оған 100 мл 85% H₃PO₄ қостық. Пайда болған қоспаны сүзгіш қағаздың көмегімен сүзіп, көлемін дистилденген сумен 1 литрге жеткізді. Толығырақ »

In vitro жағдайында моноклоналды антиделердің препаративті мөлшерін алуда,  25 мл көлемдегі  RPMI-1640  ортасына 10%  сиыр ұрығының феталды қан сарысуы қосылған пластикті матрацтарда жүзеге асырылды. Культивирлеу  37°С температурада СО₂-инкубатор жүзеге асты. Моноклоналды антиденелердің  жиналуын,  орта түсінің өзгеру интенсивтілігімен және ИФТ-ң жанама қойылымымен  бақыланады. ИФТ-ң жоғары оптикалық тығыздылығы және оң нәтижесі бойынша, матрацтардан культуралды сұйықтықты жинау гибридттік жасушаларды (1000 айн/мин 10 минут бойы центрифугалау) бөліп алу реттілікпен  өткізіледі. Толығырақ »

        Моноклоналды антиденелердің класы диффузиялық преципитация реакциясымен анықталды. Құрғақ, таза шыны  бетіне қалыңдығы 2 мм-ге жуық балқытылған 1%-ды агароза («Sigma», АҚШ) ерітіндісін құйып, ол қатқаннан кейін арнайы трафаретпен диаметрі 2-3 мм шұңқыршықтар жасады. Ортаңғы шұңқыршыққа 0,05 мл зерттелетін МКА үлгісін, ал айналасындағы шұңқыршықтарға тышқан иммуноглобулиндерінің кластарына қарсы алынған арнайы антиденелердің («Sigma», АҚШ) 0,05 мл-ін құйды. Үлгілер құйылған шыныны дымқылдатылған камераға салып, бөлме температурасы жағдайында екі тәулік ұстады. Толығырақ »

Гибридомаларды жібіту. Сұйық азот ыдысынан ерітуге арналған ампуланы алып, 37 °С температурадағы су моншасына салып, және (3-4 мин) толық ерігенше ұстау керек. Ампуланың құрамындағысын өсу ортасы бар 10 мл центрифугалық пробиркаларға көшірді және араластырды. 1000 айн/мин 5-7 минут бойы центрифугалады. Толығырақ »

Антиденлерді тазалау.Алынған дақылдың және асцидтік суйықтықтың құрамында моноклоналды антиденелерден басқа компоненттер болады. Оларды жою керек.

Иммуноглобулин М бөліп алғанда дақылды суйықтықтың 100 мл 28 гр аммоний сульфатын салады (45 пайыздық ерітінді). Қоспаны 12 сағат 4 градуста сақтайды, 20 минут 10000 об/мин центрифугаттайды. Тұнбаны 45 пайызды аммоний сульфатымен жуады, 10 мл 0,05М тристан буферінде орнына келтіреді, сефароза бар хроматографиялық колонкасынан өткізеді, 0,1М альфаметилгликозиді бар 0,05М трисбуфермен жуады. Толығырақ »

Моноклоналды антиденелерді тесттілеу. Моноклоналды антиденелерді анықтау үшін сезімталды тест-жүйелермен қолданады: радиоиммунологиялық, иммунофлуоресценттік, иммуноферменттік. Толығырақ »

Асцидтік ісікті алу. Жануарлардан гибридомалар алу үшін, олардың қарындарының ішіне гибридтік жасұшалар жаратылу мақсатымен 0,5 мл тристан (тетраметилпептадекан) немесе Фрейнд адьювантын және тұзды буфердегі керекті клонның жуылған 1 – 2 мл (1 мл – 10 жасұша) жасұшаларын еңгізеді. Тышқанның ішінде ісік белгіленеді. Толығырақ »